抗体药物生物活性分析方法开发（报告基因法）-已知信号通路

一、服务介绍
体外生物活性检测是抗体药开发中至关重要的一环。传统生物活性检测使用原代细胞，其操作繁琐且批次间差异较大，不适合高通量抗体筛选。本公司可根据客户需求，定制化开发报告基因功能性细胞系，消除对原代细胞的培养需求，克服传统方法的局限性，适用于大规模高通量抗体药筛选、生物活性测定、稳定性测定、QC 批次放行等工作。为抗体药开发提供一个稳定且价廉的工具。
本公司报告基因功能细胞系使用萤光素酶报告基因系统。此系统快速，灵敏，简便。其工作原理是配体与受体结合时细胞内特定的信号通路被激活，转录因子结合到反应元件上，诱导萤光素酶蛋白表达，加入特定的萤光素酶底物，可以检测到萤光，比较萤光强弱可反应抗体生物活性的差异。

二、服务流程

三、服务优势
一站式定制化服务：本公司提供从功能细胞系开发策略，质粒合成，下游检测和方法优化全套解决方案。您只需提供靶点名称及药物开发机制，本公司可交付细胞及对应活性分析方法。
拥有成熟的细胞系开发平台：熟练掌握多种细胞基因编辑方法，如基因敲除，定点插入，慢病毒包装，稳转细胞系构建等。
拥有成熟的生物活性分析开发和检测平台：采用了全新的萤光素酶检测底物（Furimazine）和NANOLIGHT萤光素酶，具有高灵敏度和发光信号稳定的特点，符合高通量检测的需求。
协助多个客户完成IND申报
完善的合规性建设：细胞来源清晰可追溯，可提供整套实验记录和检测报告。
全程技术支持

四、实验流程简介

1、目标细胞的选择
靶细胞需要客户自行选择，倾向选择易于转染的细胞，便于后续筛选鉴定。目标细胞选择非常重要，对于抗体药物是否敏感需要测试。
2、构建报告基因载体
通过基因序列查询，分别找到启动子区，设计引物或全基因合成报告基因载体。把目标启动子构建到NANOLIGHT 报告基因载体上，搭配使用MA0521/MA0522 NANO萤光素酶报告基因检测试剂盒。
3、双酶报告基因瞬转（MA0522-NANO&FIREFLYGLO）
构建完报告基因载体先进行瞬转目标细胞，加入抗体药物进行初筛，因为瞬转实验需要加入内参质粒来控制转染效率、细胞数等孔间差异，所以，我们选择双萤光素酶报告基因试剂盒，以辉光型MA0522 NANO&FIREFLYGLO双萤光素酶报告基因检测试剂盒作为首选。NANO萤光素酶作为表征信号，FIREFLY萤光素酶作为内对照信号。NANOLIGHT萤光素酶具有高灵敏度和发光信号稳定的特点，符合高通量检测的需求特点，是最新一代的报告基因萤光素酶，比传统萤火虫萤光素酶的辉光型试剂盒更具优势。
4、构建稳转细胞株
瞬转后用MA0522检测，如果此报告基因载体对于抗体药物敏感，需要将此载体线性化，转染到目标细胞，筛选稳转细胞系。得到对应的细胞系以后，改用单酶报告基因（MA0521- NANOLIGHT）测试，作为以后高通量检测抗体药物的方法。如果此报告基因载体对于抗体药物不敏感，需要重新评估此服务，信号通路是否正确。